驗分析法

依 ICH Q2(R2) 之則，正式驗層析分析法。涵：依法類定驗範、立特異/選擇、定線性與範、評準與精、立檢出之限與堅韌性以合監管。

用時

• 新層析法既開，行常用之前必驗
• 典法於特定實驗室驗其適
• 已驗法經重大變，需部分或全重驗
• 為監管呈備驗包（NDA、ANDA、MAA、IND）
• 法轉於新室或新儀

入

必要

• 既開之法：已優而錄之層析法（柱、流動相、梯、檢等）
• 法之類：主成分定量、雜質定量、雜質限度、識別
• 分析物參考標：附分析證與定純度之主參考標
• 樣基質：代表樣，含為特異性研究之安慰劑/空白基質

可選

• 監管之囑：ICH Q2 外之特監管要（如 USP <1225>、FDA、EMA）
• 強制降解樣：已預壓樣（酸、鹼、氧、熱、光）若未備
• 驗之程：預批之程，定接受準（GMP 境必）
• 轉之包：法轉之驗者，原室之驗報

法

第一步：依 ICH Q2(R2) 定驗範

辨法類，定所需驗參。

參	一類：定量	二類：雜質（定量）	三類：雜質（限度）	四類：識別
特異性	是	是	是	是
線性	是	是	否	否
範圍	是	是	否	否
準度	是	是	否	否
精（重複性）	是	是	否	否
精（中間）	是	是	否	否
LOD	否	或需	是	否
LOQ	否	是	否	否
堅韌性	是	是	是	否

1. 依法之意分為 ICH 之四類之一
2. 由表識諸需驗參
3. 試之前定每參之接受準。常準：
   • 線性：R² >= 0.999（定量）、>= 0.99（雜質）
   • 準度：回收 98.0-102.0%（定量）、LOQ 級 80-120%
   • 重複性：RSD <= 2.0%（定量）、LOQ 級 <= 10%
   • 中間精：RSD <= 3.0%（定量）
4. 草驗程，錄諸參、試設、與接受準
5. 試之前得程之批（GMP 境）

得：批之驗程，定法類、需參、試設、預定接受準。

敗則：法類歧（如定量+雜質合者），驗依最嚴所適。查呈型之監管囑。

第二步：立特異性與選擇性

1. 備諸液：
   • 空白（唯溶劑/稀釋）
   • 安慰劑（基質無分析物，如藥之賦形劑）
   • 工作濃之參考標
   • 加標安慰劑（基質+參考標）
   • 強制降解樣（若未備）
2. 行強制降解以生潛在降解物：

壓條	常處	目標降解
酸水解	0.1-1 N HCl，60-80 ℃，1-24 時	5-20%
鹼水解	0.1-1 N NaOH，60-80 ℃，1-24 時	5-20%
氧化	0.3-3% H2O2，室溫-60 ℃，1-24 時	5-20%
熱	60-80 ℃，固態，1-7 日	5-20%
光解	ICH Q1B（1.2M lux-時，200 Wh/m² UV）	5-20%

3. 注諸液而評：
   • 空白或安慰劑於分析物保留時無干擾峰
   • 降解物自主峰分（Rs >= 1.5）
   • 峰純以 DAD 譜純指或 MS 確
4. 計質衡：定量 + 雜質 + 降解物 應佔初容之 95-105%
5. 錄諸條之層析圖以證特異性

得：法已證特異：空白/安慰劑無干擾、降解物自分析物分、峰純已確、質衡 95-105%。

敗則：降解物與分析物共出者，法非穩定指示。返法之開以善選擇（調 pH、梯、柱化）而後驗。

第三步：定線性與範

1. 備五以上之濃級涵預期範：
   • 定量法：常為目標濃之 80-120%
   • 雜質法：自 LOQ 至規格之 120-200%
   • 溶出：自標稱之 10-120%
2. 各濃級獨備（非串稀）為佳法
3. 各級三注（少二）
4. 行響應（面或高）對濃之線性回歸：
   • 報斜、截、相關係數（R²）
   • 定量 R² >= 0.999；雜質定量 R² >= 0.99
5. 評殘差圖：
   • 殘差宜隨機分於零周，無系模
   • 殘差曲模示非線——考二次擬或縮範
6. 計 y 截為 100% 濃時響應之百分：
   • 定量法之截宜 <= 100% 響應之 2%
7. 立已驗範為線性、準、精皆已證之最低與最高濃間。

得：線性回歸 R² >= 0.999（定量）或 >= 0.99（雜質）、殘差隨機、截 <= 目標響應之 2%、已驗範明定。

敗則：R² 不及準者，察備之訛、檢之非線（濃過高）、或分析物不穩。新備重之。本性非線者，用多項式校或縮範。

第四步：評準度

1. 備準度樣於三濃級（定量常為目標之 80%、100%、120%；雜質為 LOQ、中、高）
2. 各級備三獨複（共少九測）
3. 藥物本：較得濃於已知（重量）量
4. 藥成品：用加標安慰劑法——加已知量分析物於安慰劑基質而測回收
5. 計各級回收百分：
   • 回收（%）= （得量 / 加量）× 100
6. 接受準：

法類	回收範	各級 RSD
定量（藥物本）	98.0-102.0%	<= 2.0%
定量（藥成品）	98.0-102.0%	<= 2.0%
雜質（定量）	LOQ 級 80-120%、高級 90-110%	LOQ <= 10%、高 <= 5%
清潔驗	70-130%（或依公司 SOP 更嚴）	<= 15%

7. 報各回收、均回收、各級 RSD

得：均回收於各濃級皆於準內，RSD 於限內。

敗則：回收諸級皆高或皆低者，疑系統訛於參考標、樣備、或法（如基質致 LC-MS 之離子抑）。回收亂變者，察樣備技與分析物穩。

第五步：定精

評三層精：

1. 重複性（日內）：
   • 一析、一儀、一日
   • 注 6 測於 100% 或 3 級 × 3 複（與準度同數）
   • 計結果 RSD：定量 <= 2.0%、雜質 LOQ <= 10%
2. 中間精（日間/析間）：
   • 重複以異析、異日、（若可）異儀
   • 計兩集合之全 RSD
   • 定量全 RSD <= 3.0%
   • 中間精顯劣於重複性者，究變源（析技、儀校、境）
3. 重現性（法轉或多址驗）：
   • 受室依同程行
   • 較諸室之果
   • 以 F 檢（變異較）與 t 檢（均較）或等效檢評之

精層	設	接受（定量）	接受（雜質定量）
重複性	n >= 6 於 100%、1 析、1 日	RSD <= 2.0%	LOQ RSD <= 10%、上 <= 5%
中間	2 析、2 日（或 2 儀）	RSD <= 3.0%	LOQ RSD <= 15%、上 <= 10%
重現性	多室	依程/轉準	依程/轉準

得：重複性與中間精 RSD 於準內。析/日/儀之間無顯統著差超允 RSD。

敗則：中間精較重複性遠劣者，識增變之變數（析備技、環溫、儀校漂）而控之而後重之。

第六步：立 LOD、LOQ、與堅韌性

檢出限（LOD） 與 定量限（LOQ）：

1. 以信噪法或標差法計 LOD 與 LOQ：
   • LOD = 3.3 × (σ / S)，σ = 低濃響應之標差，S = 校之斜
   • LOQ = 10 × (σ / S)
   • 別法：S/N 法——LOD 對 S/N >= 3、LOQ 對 S/N >= 10
2. 試確之：備 LOD 與 LOQ 算濃液而注：
   • LOD：峰可檢而未必精定
   • LOQ：注 6 複，確 RSD <= 10% 且準於 80-120%
3. 報 LOD 與 LOQ 並所用之法

堅韌性：

4. 識關鍵法參（常 5-7）：
   • 流動相組（±2% 有機）
   • 流動相 pH（±0.2 單位）
   • 柱溫（±5 ℃）
   • 流率（±10%）
   • 檢波長（±2 nm）
   • 柱批（若可）
5. 於指範內故變每參而他參恆（或用部分因析設以效）
6. 評於系統適性參（保留時、辨、拖、面）之影
7. 致系統適性敗於試範內之參，必嚴控並錄為關鍵法參
8. 結堅韌性果於表，示每變參、試範、及對主響之影

得：LOD 與 LOQ 已試確。堅韌性研已畢，關鍵法參已識，控限已立。

敗則：LOQ 精逾 10% RSD 者，法之敏於該濃不足。選：增注量、濃樣、改樣清、或用更敏之檢。參示法不韌（小故變即敗 SST）者，於法中嚴控之而於法轉時標。

驗

• 法類已識，諸需參依 ICH Q2(R2) 已定
• 驗程已書，預定接受準
• 特異性已證：無干擾、降解物已分、峰純已確
• 強制降解之質衡 95-105% 內
• 線性立 R² >= 0.999（定量）或 >= 0.99（雜質）、殘差隨機
• 準度於三級已證，回收於準內
• 重複性 RSD 於限內（如定量 <= 2.0%）
• 中間精 RSD 於限內（如定量 <= 3.0%）
• LOD 與 LOQ 已試確（LOQ 精 <= 10% RSD）
• 堅韌性研已畢，關鍵法參已識
• 諸生數、計、層析圖皆編入驗報

陷

• 程未批即試：GMP 境中，程批前所生驗數或不為監管所納。常先得批
• 線性用串稀：串稀傳吸頭之訛。各濃級獨自共儲備為最準線性評
• 強制降解不足：生太少（< 5%）或漏要降解物。生太多（> 30%）生二降解物擾解。每條目標 5-20% 降解
• 混重複性與中間精：重複性為同日、同析、同儀。中間精必至少變一。一二類法皆需
• 忽 LOQ 之驗步：自校曲計 LOQ 不足。算之 LOQ 必試確於該濃之精準
• 驗末方行堅韌性：準度精畢方知法不韌者，費時費物。驗早行速堅韌性篩以捕脆參
• 驗報不全：監管察期見諸生數、層析圖（非僅表數）、統析、各參之明過/敗結。缺數致缺陷信

參

• develop-gc-method -- 驗前之 GC 法開
• develop-hplc-method -- 驗前之 HPLC 法開
• interpret-chromatogram -- 讀驗試生之層析圖
• troubleshoot-separation -- 解驗中發現之疾
• conduct-gxp-audit -- 已畢驗之 GxP 合審
• write-standard-operating-procedure -- 錄已驗法為 SOP