驗析法

按 ICH Q2(R2) 正驗層析析法。涵按法類定範、以強制降解立專一性、定線性與範、評準度與精度、立 LOD/LOQ 與穩健以呈管。

用

• 新層析法成而須驗乃用→用
• 藥典法於特實驗室驗適性→用
• 已驗法經重大改、須部分或全重驗→用
• 備管呈包（NDA、ANDA、MAA、IND）→用
• 法移新實驗室或儀台→用

入

必

• 已成法：全優且錄之層析法（柱、相、梯度、檢等）
• 法類：活物含量、定量雜試、雜限試、辨試
• 物參標：附析證與定純度之首參標
• 樣基質：代樣含安慰/空基質以行專一性試

可

• 管指：超 ICH Q2 之特管要（如 USP <1225>、FDA、EMA）
• 強制降解樣：未備之預壓樣（酸、鹼、氧、熱、光）
• 驗綱：預批綱明受限（GMP 境必）
• 移包：法移時源實驗室之驗報

行

一：按 ICH Q2(R2) 定範

辨法類、定須驗參。

1. 按用意歸法於四類之一
2. 由表辨諸須驗參
3. 試前定每參之受限。典限：
   • 線性：R^2 >= 0.999（含量）、>= 0.99（雜）
   • 準度：回收 98.0-102.0%（含量）、80-120% 於 LOQ
   • 重複：RSD <= 2.0%（含量）、<= 10% 於 LOQ
   • 中間精度：RSD <= 3.0%（含量）
4. 草驗綱錄諸參、試設、受限
5. GMP 境試前須得綱批

得：批綱明法類、須參、試設、預定受限。

敗：法類含混（如含量+雜並法）→驗於最嚴類。參呈型特管指。

二：立專一性與選擇性

1. 備諸液：
   • 空白（僅溶劑/稀釋）
   • 安慰（無物之基質，如藥品之賦形）
   • 工濃之參標
   • 加標安慰（基質+參標）
   • 強制降解樣（若未備）
2. 行強制降解以生潛降解物：

3. 注諸液評：
   • 物保留時無空/安慰干擾峰
   • 降解物與主物峰分（Rs >= 1.5）
   • 以 DAD 譜純度或 MS 確峰純
4. 算質量平衡：含量+雜+降解物應為初容 95-105%
5. 錄諸條譜以證專一性

得：法示專一：無空/安慰干、降解物分、峰純確、質衡 95-105%。

敗：降解物與物共出→法非穩定指示。返法建以改選性（調 pH、梯度、柱化）乃續驗。

三：定線性與範

1. 備至少 5 濃度級貫所欲範：
   • 含量法：典 80-120% 目標濃
   • 雜法：LOQ 至 120-200% 限
   • 溶出：10-120% 標稱（或按溶出曲線需）
2. 各級獨備（非連稀）為佳法
3. 各級三注（最少二）
4. 行響（面或高）對濃線性回歸：
   • 報斜、截、相關（R^2）
   • 含量 R^2 >= 0.999；雜定量 R^2 >= 0.99
5. 評殘差圖：
   • 殘差應隨機分於零，無系統式
   • 曲殘示非線性——考二次或縮範
6. 算 y 截為 100% 響百分：
   • 含量法截應 <= 100% 響之 2%
7. 立驗範為示線、準、精之低高濃間隔

得：線回歸 R^2 >= 0.999（含量）或 >= 0.99（雜）、隨機殘差、截 <= 目響 2%、驗範清。

敗：R^2 不及→察備誤、檢非線（濃過高）、物不穩。新備重試。內非線→用多項校或縮範。

四：評準度

1. 備準樣於 3 濃度級（含量典 80%、100%、120% 目；雜法 LOQ、中、高）
2. 每級備 3 獨重複（最少 9 定）
3. 藥物：較得濃與已知（重力）量
4. 藥品：用加標安慰法——安慰加已知物量、量回收
5. 算每級回收百分：
   • 回收（%）= （得量/加量）× 100
6. 受限：

7. 報每級個回收、平均回收、RSD

得：諸級平均回收於受限內、RSD 於限。

敗：回收諸級恆高或低→疑參標、樣備、法之系統誤（如基質致 LC-MS 離子壓）。回收亂變→察樣備技與物穩。

五：定精度

評三級精度：

1. 重複（同日）：
   • 一析者、一儀、一日
   • 100% 注 6 定或 3 級 × 3 重（同準度數）
   • 算 RSD：含量 <= 2.0%、雜 LOQ <= 10%
2. 中間（日間/析者間）：
   • 異析者、異日、（若有）異儀，重複試
   • 算合二集之總 RSD
   • 含量總 RSD <= 3.0%
   • 中間遠差於重複→究變源（析技、儀校、環）
3. 再現性（法移或多址驗）：
   • 受方依同綱行
   • 較實驗室間果
   • 以 F 試（變異較）與 t 試（均較）或等效試評

得：重複與中間 RSD 於受限。析者/日/儀間無顯異超允 RSD。

敗：中間遠差於重複→辨驅加變之變（析者備技、室溫、儀校漂）、控之乃重試。

六：立 LOD、LOQ、穩健

檢測限（LOD）與定量限（LOQ）：

1. 以信噪法或標準偏差法算 LOD 與 LOQ：
   • LOD = 3.3 × (sigma/S)，sigma=低濃響標準偏差，S=校斜
   • LOQ = 10 × (sigma/S)
   • 替：S/N 法——LOD 對 S/N >= 3、LOQ 對 S/N >= 10
2. 試驗證：備算 LOD 與 LOQ 濃液注：
   • LOD：峰可測但未必可定
   • LOQ：注 6 重、確 RSD <= 10% 與準度於 80-120%
3. 報 LOD 與 LOQ 附定法

穩健：

4. 辨關鍵法參（典 5-7 因）：
   • 相成（±2% 有機）
   • 相 pH（±0.2）
   • 柱溫（±5 C）
   • 流（±10%）
   • 檢波長（±2 nm）
   • 柱批（若有）
5. 各參故意於規範變、餘恆（或用部分階乘設以效）
6. 評對適性參（保留、解、拖、面）之影
7. 致適性敗於試範之參須緊控、錄為關鍵法參
8. 摘穩健果於表，示各變參、試範、對關鍵響之影

得：LOD 與 LOQ 試驗證。穩健試畢、關鍵法參辨、控限立。

敗：LOQ 精超 10% RSD→法靈於該濃不足。可：增注量、濃樣、改樣淨、用更靈檢。參示法不穩（小變致 SST 敗）→緊控該參於法、移時旗之。

驗

• 法類辨、按 ICH Q2(R2) 定諸須參
• 驗綱書附預定受限
• 專一性示：無干、降解物分、峰純確
• 強制降解質衡 95-105%
• 線立 R^2 >= 0.999（含量）或 >= 0.99（雜）、殘隨機
• 準度三級示、回收於受限
• 重複 RSD 於限（如含量 <= 2.0%）
• 中間精度 RSD 於限（如含量 <= 3.0%）
• LOD 與 LOQ 試證（LOQ 精 <= 10% RSD）
• 穩健試畢、關鍵法參辨
• 諸原數、算、譜匯入驗報

忌

• 綱批前始試：GMP 境綱批前生數或不為管受。先得批
• 線用連稀：連稀傳吸量誤。各濃由共儲獨備為最準線評
• 強制降解不足：< 5% 漏要降解物。> 30% 生次降解物擾解。每條目 5-20%
• 重複與中間混：重複為同日同析同儀。中間須變至少一。一二類法皆須
• 略 LOQ 證步：由校曲算 LOQ 不足。算 LOQ 須試證可受精與準
• 穩健遲行：準度精度後覓法不穩耗時材。早行速穩健察以捕脆參
• 驗報不全：管審期諸原數、譜（非僅表數）、統析、明過/敗結。缺數致缺信

參

• develop-gc-method -- 驗前 GC 法建
• develop-hplc-method -- 驗前 HPLC 法建
• interpret-chromatogram -- 讀驗試所生譜
• troubleshoot-separation -- 解驗中現之疾
• conduct-gxp-audit -- 審畢驗以合 GxP
• write-standard-operating-procedure -- 錄已驗法為 SOP